低电压无负染，以“柔”克刚！脂质体囊泡成像福音，生物型透射电镜LVEM

脂质体—高效的载药颗粒

-----以无厚入有间，游刃有余

    脂质体是类由双层脂质分子结构的封闭囊泡型人工膜。由于其和细胞膜的脂质双分子层有高度相似的性，脂质体可以与细胞膜相融合，从而将其囊泡内包裹的载物释放到细胞内。用这性，研究者们克服了传统药物递送中的诸多障碍，得以将药物分子/颗粒包裹在脂质体中，直接将药物递送到细胞内部，使之成为了类高效的药物载体。尤其在近期的新·冠疫情中，各类mRNA疫苗纷纷采用了脂质体作为递送载体，有效地避免了核酸被降解，提高了mRNA进入细胞的效率。脂质体的应用使得mRNA疫苗真正成为了种稳定、高效可以广泛使用的疫苗，也促进了脂质体研究的广泛开展。

   在脂质体的应用研究中，质量控制往往十分重要也尤为困难的环。脂质体的质量（如其包封率、载药率与稳定性）很大程度上取决于其囊泡的结构是否均匀、稳定，这就需要研究人员对脂质体进行透射电镜成像，来直接观测脂质体的囊泡结构、粒径等形态信息。

传统生物样品透射成像的桎梏

------刚者易折，过犹不及

    随着科研的进步，人们对成像仪器的要求与日俱增。但是即便在高分辨成像设备多如牛毛的今天，生物样品的透射电镜成像却直是个难题。所谓“电镜易得，样品难求”，如何制得个无损的电镜样品从而拍摄到清晰、高反差的生物样品图片，直是生物样品透射电镜成像中的大的难题，也是脂质体等脆弱的囊泡类生物样品在电镜成像中亟待解决的难题。

    这个难题很大程度上是由透射电镜的高电压与制样中的染色/负染步骤导致的。

    生物样品般由C、H、O、N等原子序数较低的“轻质”元素组成，在传统透射电子显微镜高达120kV的高能电子束轰击下，很快就会被击穿甚至灰飞烟灭，不能留下任何图像。也就是说生物样品在传统的透射电镜成像中太过于“脆弱”，需要给这些样品穿上层“盔甲”，这层盔甲就是用些电子密度高的物质(如重金属盐等)对生物样品进行染色。而在本文中所说的脂质体等囊泡状的生物样品制样过程中，这个染色步骤就叫做“负染”。

    负染是在使用传统透射电镜对生物样品成像时“不得不”采用的样品处理手段，但是负染的处理手段也会带来显著的问题：

    、就是生物样品制样复杂，在制样染色过程中，样品容易产生收缩、膨胀、破碎以及内含物丢失等结构改变；

    第二、重金属盐离子本身会对生物样品的形貌造成不可逆的损害，这种损害在传统制样过程很难避免；

    第三、负染所得的“负像”并不能真实地反映生物样品的形貌征，尤其对于脂质体等囊泡结构，囊泡表面局部凹陷，可能会有少量染液遗留在凹陷处，或者载网表面有负染液残留的痕迹等，这些负染液在电镜观察时就会产生“假象”；

    第四、对于制样操作者的要求较高，生物样品的种类多种多样，而每种生物样品负染时佳的制样条件（重金属盐溶液的种类、浓度，染色的时间长短等）都不样。这就需要制样人员根据各自实验室的条件，在长时间地摸索与多次地试错来获取佳的制样条件，大量宝贵的时间和样品就这样浪费在染色制样条件的摸索中了；

    第五、传统透射电镜操作复杂，维护困难，而实验平台的透射电镜往往“时”难求，生物样品的佳观测时间往往较短，经常会出现获得好的生物样品，却发现电镜早要在周后才能预约的尴尬局面；

    后，即便已经采用了负染等手段，脂质体类的囊泡生物样品还是非常脆弱的，在成像过程中经常会出现囊泡被长时间电子流照射给“轰碎”的状况，这就迫使操作者加快操作速度，更加手忙脚乱。

摆脱传统电镜桎梏的生物型透射电镜

------柔者易存，易低为高

    Delong Instrument公司推出的LVEM生物型透射电子显微镜（LVEM5&25）采用了5kV与25kV的低加速电压设计，次性地摆脱了上述所有的生物电镜成像难题，为生物样品的电镜成像提供尤为便捷高效的解决方案。

高衬度：低能量电子对有机分子产生更强烈的散射，具有更高对比度；

无需染色：突破以往生物/轻材料成像需要重金属染色的局限性；

高分辨率：无染色条件下能够达到1.5 nm的图像分辨率；

多模式：LVEM5能够在TEM、SEM、STEM三种模式中自由切换；

高效方便：真空准备只需要3分钟，空间小，环境需求低；

易操作且成本低：友好智能化操作界面，低耗材，低维护费用，无需业操作人员。

生物样品友好                              

-------柔者以万物

    LVEM生物型透射电镜采用的5kV与25kV低电压设计，对生物样品不会造成任何损伤，与传统高压电镜相比，低电压反而提高了生物样品成像的衬度/反差；无需重金属染液负染，对于脂质体等囊泡结构成像条件温和，摆脱了染液与负染过程本身可能对囊泡结构造成的损害，所得图像为“正像”，更加真实地展现囊泡的结构征。

生物样品细节损失少

------见微知著明察秋毫

    如下图所示，传统高压透射电镜本身就会带来样品细节损失，在80-120kV下的透射电镜成像过程中，大量十几纳米尺寸的颗粒会直接被“击穿”。而LVEM生物型透射电镜采用的5kV与25kV低电压设计，不仅避免了传统高压透射电镜长时间照射对于生物样品的损害，还可以保留下更多地小有机颗粒图像，获得更多地细节。

小型化设计，操作更加方便

------芥子须弥内藏乾坤

    传统透射电子显微镜体积庞大，对放置环境有严格的要求，并且需要水冷机等外置设备。通常会占据整间实验室。LVEM电镜从根本上区别于传统电镜，尺寸较传统电镜缩小了90%，对放置环境无严格要求，无需任何外置冷却设备，可以安装在用户所需的任意实验室或办公室桌面。操作界面智能化，更加方便。

LVEM生物型电镜案例

    LVEM生物型透射电镜对生物样品成像友好，除了脂质体之外，对于病毒颗粒、外泌体、噬菌体、DNA、细胞切片等生物样品的成像效果也非常秀，可以满足研究人员多样化的成像需求，且其操作简便，制样简单，是使生物科研工作者研究更加游刃有余的“科研器”。

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1、低电压台式透射电子显微镜-LVEM5（生物域）

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